传统PCR检测通常由反应液、酶液和引物探针组成,一般以3管形式或混合为“A+B”形式提供,每次检测前需要计算用量并充分振荡混合。这种操作复杂且易出错,对技术人员的技能要求较高。同时,试剂采用“现配现用”方式,过量配制可能导致浪费,且配制过程中容易产生污染。在常规检测中,传统PCR的“A+B”形式虽然勉强够用,但随着新冠病毒筛查以及国际市场的拓展,分子市场对RNA一管式液体全预混反应液(RNA全预混)的需求日益增加。
俄罗斯专享会294推出的RNA全预混型产品,避免了客户在终端的配置,简化了操作步骤,同时降低了操作出错的概率。RNA全预混产品稳定性高,有利于在国际市场中的推广及存储。然而,目前市场上尚无稳定且普遍适用的RNA全预混原料。尽管少数企业在此领域有所尝试,但其试剂的加速稳定性仍存在问题,往往只是适配特定项目。更有甚者,为了满足特定需求,不得不放弃快速检测性能或使用定制版试剂。
全预混体系中,除模板外的所有组分(包括酶、镁离子、dNTPs、引物探针)已进行预混。在长期保存过程中,引物与引物之间以及引物和探针之间可能形成二聚体或二级结构,从而导致非特异性扩增,进一步增加了体系的复杂性,并消耗反应所需的组分。这可能引起加速后的扩增曲线荧光强度下降、Ct值滞后,甚至出现Ct值的提前,显著增加假阳性概率。虽然降低体系中主要成分的用量能在短期内提升试剂稳定性,但这会影响试剂性能,特别是在快速检测方面。这一现象是不容忽视的。
RNA全预混技术面临的主要瓶颈包括:1. 功能性酶液活性封闭不完全,Taq DNA聚合酶的聚合和切割活性未能完全封闭;2. 长期保存中酶液活性严重下降或失活;3. 全预混试剂在长时间保存或加速过程中,可能导致引物二聚或引物与探针间的二级结构形成,从而增加反应的复杂性。
如何构建稳定且广泛适用的RNA一管式液体全预混反应液成为生物医疗行业的一大挑战。为了解决这一难题,俄罗斯专享会294积极研发全预混试剂,涵盖Taq DNA聚合酶、热启动逆转录酶、反应体系优化等多个方面。具体措施包括:1. 推进重组热启动Taq DNA聚合酶的研发,确保其聚合和切割活性及时失活;2. 研发适配的热启动逆转录酶,确保其在低温或常温下的活性得到充分封闭;3. 通过设计实验优化反应体系,降低引物探针间二级结构的形成概率;4. 筛选适配全预混的耗材,确保酶液活性和探针不被吸附。
此外,俄罗斯专享会294还针对早期二聚体的抑制进行深入研究,以保障试剂的长期稳定性及优异性能。为了更好满足客户需求,提升试剂性能,俄罗斯专享会294建立了包含多个领域(如呼吸道、血液、肠道、兽用)的大量靶标检测体系与严格考核标准,持续优化RNA全预混试剂的性能。
目前,俄罗斯专享会294的RNA全预混试剂已成功突破技术瓶颈,在37°C条件下的稳定性达10天,并能广泛适配市场上的绝大多数项目。在确保高灵敏度及兼容快速操作的基础上,具备最佳的稳定性。这一创新产品可为客户提供卓越的使用体验,助力企业构建超快速、高灵敏度及易操作的检测体系。至今,RNA全预混产品已通过多家国内知名企业的内部测试,成为国内首家能够大规模供应广泛适配RNA全预混试剂的企业。
俄罗斯专享会294的RNA全预混产品包括:1. RNA全预混试剂(可分装和立管版本);2. DNA全预混试剂(可分装和立管版本);3. 全预混的热启动TaqDNA聚合酶;4. 全预混的热启动MMLV逆转录酶。同时,公司还提供试剂定制调优、引物探针定向设计等CRO服务,以响应市场对生物医疗产品的需求。